马相伯,原名建常,又名良,江苏丹阳人。幼读儒家经书,虔奉天主教。11岁入上海依纳爵公学(后改名徐汇公学)。清同治六年(1867年),入徐家汇天主教耶稣会小修院。同治九年获神学博士学位,罗马教廷授予司铎职。同治十一年任徐汇公学校长。光绪七年(1881年),出任清政府驻日本参赞,旋改任驻神户、长崎领事等职。光绪九年赴法国考察商务,
并旅居美国、欧洲。前后十多年,投身于洋务运动。光绪二十九年,马发起创办震旦学院,因不宣传教理,教会竟派一神父来院主持教务,引导学生专习法文。学生大哗,要求集体退学。马完全同情学生,当即率领学生离开震旦。光绪三十一年七月,创办复旦公学,被公推为校长。他延聘具有真才实学、热心教育的学者担任教师,如原震旦高班学生、参加集体退学的邵力子,入复旦任国文教员。民国元年(1912年),南京临时政府将徐家汇李鸿章祠堂(今华山路复旦中学)拨作复旦校舍,仍推马为校长。民国6年,复旦公学扩充大学。民国11年,大学部迁入江湾校舍,李公祠原址作为复旦附中校舍。
辛亥革命后,马一度代理北京大学校长,后去职创办西山讲学社(辅仁大学前身),又办了培根女校。民国9年冬,马回上海休养,虽年过八旬,仍坚持反对军阀,反对内战,提倡民治,增养民生。民国20年九一八事变后,马积极投身抗日救亡运动,力主对内团结、一致抗日,并竭力营救民主人士,被各界尊为“爱国老人”。民国21年,参加宋庆龄、鲁迅等组织的“中国民权保障同盟”。抗日战争爆发后,初移居桂林,后取道越南拟转赴昆明,行至谅山,病逝于旅寓。1984年,迁葬上海万国公墓。
复旦中学校园内今竖有马半身铜像,以资纪念。