原名陆熙顺,天主教徒,生于上海南市。18岁中秀才。21岁师从天主教堂龚神甫,学习法语及科技知识。曾参与编纂《法华新字典》,并先后任比利时洋行职员和法租界薄石律师事务所的帮办。20世纪初,曾以上海总商会代表名义,赴美国、意大利、瑞士等国观光考察,受到罗马教皇接见。

    宣统三年(1911年),由李平书推荐,陆伯鸿担任债台高筑、濒临倒闭的华商内地电灯公司经理。由于管理有方,数年内南市电灯数由原1000余盏激增至7万盏。公司由此转亏为盈。民国元年(1912年)受李平书之托筹建华商电车公司。为招徕乘客在每辆电车车头上安装“绿、白、红”(与“陆伯鸿”谐音)3色的电灯,乘客为之大增。民国7年,电灯与电车两公司合并,改名华商电气股份有限公司,陆伯鸿任总经理。继而他又任闸北水电公司经理、上海航业同业公会执委、法租界公董局华董和全国民营电业联合会委员长等职。

    第一次世界大战前夕,国际市场钢铁价格猛涨。民国2年11月,陆伯鸿以和兴实业公司名义集资本银12.5万两,后增至100万两,在浦东周家渡创办和兴化铁厂。日产生铁最高时曾达35吨,民国10年陆伯鸿又与德商合资筹建和兴钢铁厂,解放后改名上海第三钢铁厂。所产方形、圆形竹节钢,质量及外观可与进口钢媲美。当时上海建造的海关大楼、沙逊大楼、闸北水电厂和法商自来水厂以及南京中山陵,都曾采用和兴钢铁厂生产的竹节钢。陆伯鸿还创办了大通航业公司,借用境内求新厂船坞,造出了“隆大”、“志大”和“正大”3艘客轮。民国26年淞沪抗战爆发,陆伯鸿遵照政府安排,将其中一艘轮船自沉于江阴附近长江之中,以阻止日军西进。

    陆伯鸿同海外人士交往密切,积极从事宗教活动,关心社会慈善事业。他先后操办了新普育堂、上海普慈疗养院、圣心医院、中国公立医院、南市时疫医院、杨树浦诊疗所、合办北京中央医院7所慈善机构。其中,民国元年创建于陆家浜南的新普育堂,分设学校、工场、医疗、养老、育幼、残废、疯癫等各部,陆伯鸿任主任,请天主教修女为看护。开办初6年中,先后收养男女102525人次,施医给药者达2194070人次。此外,他还创办5所男女中小学校。法国作家琼·麦森颂扬陆伯鸿“能以事业上之长才与宗教上之热诚,融为一炉,反映其作为企业家、慈善家的才能。”

    民国26年12月30日,陆伯鸿遇刺身亡。